化妝品體內(nèi)哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)是一種體內(nèi)遺傳毒性測(cè)試方法，通過(guò)觀(guān)察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（常用小鼠、大鼠）骨髓或外周血中紅細(xì)胞的微核，來(lái)評(píng)估化妝品原料或終產(chǎn)品經(jīng)體內(nèi)接觸后，是否具有誘發(fā)染色體損傷或紡錘體損傷的潛在遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)。

　　化妝品體內(nèi)哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)?zāi)康?/h2>

　　1、識(shí)別染色體損傷效應(yīng)

　　微核的形成主要與兩種染色體損傷相關(guān)：一是受試物導(dǎo)致染色體發(fā)生斷裂，產(chǎn)生的片段因無(wú)法隨細(xì)胞分裂進(jìn)入子細(xì)胞核，而形成獨(dú)立的微核；二是受試物干擾細(xì)胞紡錘體功能，導(dǎo)致染色體不能正常分離，使整個(gè)染色體或染色單體滯留在細(xì)胞質(zhì)中，形成微核。通過(guò)計(jì)數(shù)微核率，可直接判斷受試物是否具有這類(lèi)遺傳毒性。

　　2、評(píng)估體內(nèi)代謝后的真實(shí)風(fēng)險(xiǎn)

　　受試物經(jīng)口服、皮膚涂抹等方式進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后，會(huì)經(jīng)過(guò)肝臟等器官的代謝轉(zhuǎn)化。試驗(yàn)?zāi)茉u(píng)估受試物及其代謝產(chǎn)物共同作用下的遺傳毒性，避免因體外試驗(yàn)無(wú)法模擬體內(nèi)代謝過(guò)程，而遺漏某些經(jīng)代謝后才產(chǎn)生的致突變風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)果更具生物學(xué)意義。

　　3、為化妝品安全評(píng)估提供體內(nèi)數(shù)據(jù)支撐

　　作為體內(nèi)遺傳毒性試驗(yàn)，其結(jié)果與體外試驗(yàn)（如體外細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)）相互補(bǔ)充，形成“體外+體內(nèi)”的完整評(píng)估鏈條，為化妝品原料的安全性審核和產(chǎn)品合規(guī)上市提供關(guān)鍵的體內(nèi)毒理學(xué)數(shù)據(jù)。

　　化妝品體內(nèi)哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)流程

　　1）試驗(yàn)準(zhǔn)備與動(dòng)物選擇

　　動(dòng)物模型：首選嚙齒類(lèi)動(dòng)物，常用健康的ICR或昆明種小鼠，體重一般為25-35g，雌雄各半。

　　動(dòng)物分組：至少設(shè)置3個(gè)劑量組、1個(gè)陰性對(duì)照組（給予溶媒，如生理鹽水）和1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照組（給予已知致突變劑，如環(huán)磷酰胺），每組至少5只動(dòng)物。

　　2）受試物給予與處理

　　給予途徑：通常采用經(jīng)口灌胃方式，也可根據(jù)化妝品實(shí)際使用場(chǎng)景（如皮膚接觸）考慮經(jīng)皮涂抹等途徑。

　　給予劑量與周期：根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果設(shè)定劑量，高劑量需引起輕微毒性但不導(dǎo)致大量動(dòng)物死亡，低劑量接近無(wú)毒性水平，組間距一般為2-4倍。通常連續(xù)給予受試物2-3天，末次給藥后18-24小時(shí)處死動(dòng)物。

　　3）樣本采集與制備

　　骨髓采集：處死動(dòng)物后，剝離股骨，用生理鹽水沖洗骨髓腔，收集骨髓細(xì)胞懸液。

　　涂片與固定：將細(xì)胞懸液均勻涂抹在載玻片上，自然干燥后，用甲醇固定10-15分鐘，待玻片干燥。

　　染色：常用吉姆薩染液或瑞氏-吉姆薩混合染液染色，染色后水洗、干燥，制成可供顯微鏡觀(guān)察的標(biāo)本。

　　4）鏡檢觀(guān)察與結(jié)果判定

　　細(xì)胞選擇：在光學(xué)顯微鏡下，選擇分散良好、染色清晰的骨髓嗜多染紅細(xì)胞（PCE）進(jìn)行觀(guān)察。這類(lèi)細(xì)胞處于未成熟階段，對(duì)染色體損傷更敏感，是微核檢測(cè)的理想細(xì)胞。

　　微核計(jì)數(shù)：每只動(dòng)物至少觀(guān)察1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，記錄含有微核的細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算微核率（千分率，‰）。同時(shí)，計(jì)數(shù)200個(gè)紅細(xì)胞，計(jì)算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞（NCE）的比例，評(píng)估受試物對(duì)細(xì)胞成熟的影響。

　　結(jié)果判定：若高劑量組微核率顯著高于陰性對(duì)照組，且存在劑量-反應(yīng)關(guān)系，或某一劑量組微核率顯著高于陰性對(duì)照組并超過(guò)歷史陰性對(duì)照范圍，則判定受試物在本試驗(yàn)條件下具有致突變性。