?洗滌劑中的“抑菌”是指通過抑制細菌的生長和繁殖，將其數(shù)量控制在無致病風險的范圍內(nèi)，而不是完全殺滅細菌??。根據(jù)行業(yè)標準，抑菌型洗滌劑的效果是通過抑制細菌的生長來實現(xiàn)的，其抑菌率需達到50%以上?。洗滌劑抑菌試驗有哪些方法步驟？

　　?洗滌劑抑菌試驗方法

　　1、抑菌環(huán)法

　?。?）試驗原理

　　將含有洗滌劑的樣品放置在接種有指示菌的培養(yǎng)基表面，洗滌劑中的抑菌成分向周圍擴散，形成抑菌區(qū)域，通過測量抑菌環(huán)的直徑來判斷洗滌劑的抑菌能力。

　?。?）具體操作

　　將冷卻至50℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注于無菌平皿中，每皿約15-20mL，待其凝固。用無菌移液器吸取0.1mL指示菌菌懸液，均勻涂布于瓊脂平板表面。

　　將無菌牛津杯（或浸有樣品的濾紙片）輕輕放置在涂布好菌液的平板上，每個平板放置3-4個，注意保持適當間距。將平板置于（35±2）℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)18-24h（細菌）或48h（酵母菌）。

　?。?）結(jié)果觀察

　　培養(yǎng)結(jié)束后，測量抑菌環(huán)直徑（從牛津杯或濾紙片邊緣到抑菌圈邊緣的垂直距離），以毫米（mm）為單位記錄。抑菌環(huán)直徑越大，表明洗滌劑的抑菌效果越強。同時需設置陽性對照（已知有抑菌作用的物質(zhì)）和陰性對照（無菌水或無抑菌作用的溶劑）。

　　2、懸液定量法

　?。?）試驗原理

　　通過測定洗滌劑溶液與菌懸液混合作用后，殘留的活菌數(shù)量，計算抑菌率，從而評估洗滌劑的抑菌效果。

　　（2）具體操作

　　吸取5mL洗滌劑樣品稀釋液（若測試原液，直接取5mL原液）放入滅菌試管。向試管中加入0.5mL實驗菌液，迅速混勻并開始計時。達到規(guī)定作用時間后，立即吸取0.5mL混合液，加入到含有4.5mL滅菌的中和劑（或PBS）的試管中，中和10min。

　　中和結(jié)束后，吸取1mL該溶液至培養(yǎng)皿中，傾注適宜的培養(yǎng)基（如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌，沙氏瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌），待培養(yǎng)基凝固后，倒置平板，于（35±2）℃培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌）。

　　培養(yǎng)結(jié)束后，進行活菌菌落計數(shù)。同時設置陽性對照組（菌懸液+PBS）、陰性對照組（中和劑+PBS）和中和劑對照組（菌懸液+中和劑）。

　?。?）結(jié)果計算

　　抑菌率（%）=[（陽性對照組平均菌落數(shù)-試驗組平均菌落數(shù)）÷陽性對照組平均菌落數(shù)]×100%

　　3、載體浸泡定量法

　?。?）試驗原理

　　將染菌的載體浸泡在洗滌劑溶液中，經(jīng)過一定時間作用后，檢測載體上殘留的活菌數(shù)量，計算抑菌率，以評估洗滌劑對載體上細菌的抑制作用。

　?。?）具體操作

　　制備染菌載體：將無菌載體浸泡在指示菌菌懸液中，取出后瀝干或干燥，使載體上的菌量達到一定濃度（如1×10?-1×10?cfu/載體）。

　　取染菌載體放入含有洗滌劑溶液的試管中，按規(guī)定的溫度和時間進行浸泡。浸泡結(jié)束后，取出載體，放入含有中和劑的試管中，振蕩一定時間，使載體上的細菌被充分洗脫。取洗脫液進行活菌菌落計數(shù)，同時設置陽性對照組（染菌載體+PBS）和陰性對照組（中和劑+PBS）。

　　（3）結(jié)果計算

　　抑菌率（%）=[（陽性對照組平均菌落數(shù)-試驗組平均菌落數(shù)）÷陽性對照組平均菌落數(shù)]×100%