醫(yī)用清洗劑α-淀粉酶活力是衡量酶制劑活性狀態(tài)的量化指標(biāo)，體現(xiàn)了α-淀粉酶在特定環(huán)境下保持水解淀粉功能的能力。醫(yī)用清洗劑α-淀粉酶活力檢測是保障產(chǎn)品有效性的關(guān)鍵，可精準(zhǔn)評估清洗劑在生產(chǎn)、儲存、使用全周期中的酶活性變化，判斷產(chǎn)品是否仍能滿足去污要求，為有效期確認(rèn)、儲存條件優(yōu)化提供科學(xué)依據(jù)，避免使用失效產(chǎn)品影響清洗效果。

　　醫(yī)用清洗劑α-淀粉酶活力檢測全流程步驟

　?。?）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

　　a.選取已知活力的α-淀粉酶標(biāo)準(zhǔn)品，用pH=6.0磷酸緩沖液配制濃度梯度為0U/mL、20U/mL、40U/mL、60U/mL、80U/mL、100U/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)酶液，確保濃度分布均勻覆蓋檢測范圍。

　　b.取6支潔凈的具塞試管，編號為1至6，其中試管1作為空白對照。向試管1中加入0mL標(biāo)準(zhǔn)酶液與1.0mL磷酸緩沖液，試管2至6分別加入0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL對應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)酶液，再分別補加0.8mL、0.6mL、0.4mL、0.2mL、0mL磷酸緩沖液，最后向所有試管中均加入2.0mL1%淀粉溶液，保證各試管反應(yīng)體系總體積一致。

　　c.將所有試管充分搖勻后，迅速放入已預(yù)熱至60℃的恒溫水浴鍋中，精準(zhǔn)計時反應(yīng)30min，期間避免水浴溫度波動超過±0.5℃。

　　d.反應(yīng)結(jié)束后，立即向每支試管中加入1.0mL0.1mol/L硫酸溶液，快速搖勻終止酶促反應(yīng)，隨后將試管取出冷卻至室溫。

　　e.向每支試管中加入0.5mL碘液，搖勻后靜置顯色10min，確保顯色均勻且穩(wěn)定。

　　f.以試管1為空白對照，將分光光度計調(diào)至660nm波長，依次測定試管2至6的吸光度值，記錄每支試管的實際讀數(shù)。

　　g.以標(biāo)準(zhǔn)酶液的活力濃度（U/mL）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過線性回歸分析計算回歸方程y=ax+b，要求線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.999，否則需重新繪制。

　　（2）樣品酶活力檢測

　　a.取3支具塞試管，分別標(biāo)記為樣品管1、樣品管2（平行樣）和樣品空白管，確保實驗重復(fù)性。向樣品管1和樣品管2中分別加入0.5mL磷酸緩沖液、0.5mL待測樣品液和2.0mL1%淀粉溶液；向樣品空白管中先加入1.0mL0.1mol/L硫酸溶液，再加入0.5mL磷酸緩沖液、0.5mL待測樣品液和2.0mL1%淀粉溶液，提前終止酶活性以消除樣品本身對顯色的干擾。

　　b.將樣品管1、樣品管2充分搖勻后，與樣品空白管一同放入60℃恒溫水浴鍋中，樣品管精準(zhǔn)計時反應(yīng)30min，樣品空白管同步放置但無需計時，確保反應(yīng)條件一致。

　　c.反應(yīng)結(jié)束后，立即向樣品管1、樣品管2中分別加入1.0mL0.1mol/L硫酸溶液終止反應(yīng)，將所有試管取出冷卻至室溫。

　　d.向3支試管中分別加入0.5mL碘液，搖勻后靜置顯色10min，隨后以樣品空白管為對照，在分光光度計660nm波長下測定樣品管1和樣品管2的吸光度值，取兩者平均值作為最終樣品吸光度A樣。

　?。?）數(shù)據(jù)計算與結(jié)果判定

　　a.酶活力計算：將樣品吸光度平均值A(chǔ)樣代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程y=ax+b，計算出樣品反應(yīng)液的酶活力濃度C（單位：U/mL），再按公式X=C×n計算原始樣品的α-淀粉酶活力。其中，X為原始樣品酶活力（液體樣品單位為U/mL，固體樣品單位為U/g），n為樣品預(yù)處理過程中的稀釋倍數(shù)，計算過程需保留四位有效數(shù)字。

　　b.結(jié)果判定（依據(jù)T/WSJD002-2019）：若產(chǎn)品標(biāo)注含α-淀粉酶成分，需滿足淀粉去除率≥60%；有效期內(nèi)樣品的酶活力下降率需≤20%，即實測活力≥產(chǎn)品初始標(biāo)注活力×80%；同時，樣品管1和樣品管2的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）需≤5%，若RSD超出范圍或酶活力未達(dá)標(biāo)，需排查操作誤差后重新檢測。