在醫(yī)療清洗領(lǐng)域，蛋白酶作為醫(yī)用多酶清洗劑的核心功能成分，其活力直接決定醫(yī)療器械表面蛋白質(zhì)類污染物的分解效率，是保障器械清潔度、防范交叉感染的關(guān)鍵指標(biāo)。醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力檢測不僅是產(chǎn)品合規(guī)上市的必要環(huán)節(jié)，更是醫(yī)療機(jī)構(gòu)選型、監(jiān)管部門執(zhí)法的重要依據(jù)。

　　醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力檢測行業(yè)通用方法

　　目前行業(yè)內(nèi)主流的蛋白酶活力檢測方法以國家標(biāo)準(zhǔn)和團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，其中偶氮酪蛋白法與福林酚顯色法應(yīng)用最廣泛，兩種方法各有適配場景，檢測流程規(guī)范且結(jié)果精準(zhǔn)可溯源。

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　　該方法通過檢測蛋白酶水解偶氮酪蛋白產(chǎn)生的可溶性顯色產(chǎn)物，定量計算酶活力，適用于各類含蛋白酶的醫(yī)用清洗劑檢測，具體步驟如下：

　　樣品預(yù)處理：取醫(yī)用清洗劑樣品，用pH緩沖液稀釋至適宜濃度（避免酶濃度過高導(dǎo)致反應(yīng)過快，通常稀釋100-200倍），確保檢測處于線性反應(yīng)區(qū)間；

　　恒溫反應(yīng)：取1mL稀釋樣品與2mL偶氮酪蛋白底物液混合，置于37℃恒溫水浴中精準(zhǔn)反應(yīng)10分鐘，嚴(yán)格控制反應(yīng)時間誤差≤±10秒；

　　終止反應(yīng)：快速加入2mL三氯乙酸（TCA）溶液，搖勻后靜置10分鐘，使未反應(yīng)的蛋白質(zhì)充分沉淀；

　　分離與檢測：用定性濾紙過濾反應(yīng)液，取濾液在440nm波長下，以空白對照液（緩沖液+底物液+TCA，不含樣品）為基準(zhǔn)測定吸光度值（A）；

　　活力計算：采用5個濃度點的蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過吸光度值換算樣品酶活力，行業(yè)默認(rèn)實測值不低于產(chǎn)品標(biāo)注值的80%即為合格。

　　（二）福林酚顯色法

　　該方法以酪蛋白為底物，利用蛋白酶水解產(chǎn)生的酪氨酸與福林酚試劑的顯色反應(yīng)定量，適用于高精準(zhǔn)度檢測場景，流程如下：

　　樣品稀釋：按1:200比例稀釋樣品，取2mL稀釋液與2mL酪蛋白底物（0.5%濃度，pH7.5磷酸緩沖液配制）混合；

　　酶促反應(yīng)：37℃恒溫水浴反應(yīng)10分鐘后，加入2mL三氯乙酸終止水解；

　　顯色反應(yīng)：過濾后取2mL濾液，加入5mL堿性福林試劑，再次置于37℃環(huán)境反應(yīng)20分鐘；

　　定量檢測：用可見分光光度計在660nm波長下測定吸光度，與胰蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)曲線對比，計算酶活性值，合格標(biāo)準(zhǔn)為成品蛋白酶活性不低于5000U/g。

　　此外，針對低泡型醫(yī)用清洗劑，需增加泡沫預(yù)消除處理：采用40kHz超聲波預(yù)處理樣品30秒（功率密度0.3W/cm2），配合25℃恒溫磁力攪拌（轉(zhuǎn)速300rpm），可在不影響酶活性的前提下消除泡沫干擾，使檢測結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）控制在3.2%以內(nèi)。

　　醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力檢測技術(shù)要求

　　T/WSJD002-2019《醫(yī)用清洗劑衛(wèi)生要求》，由中國衛(wèi)生監(jiān)督協(xié)會發(fā)布，規(guī)定了酶活力測定的方法優(yōu)化、穩(wěn)定性要求等。同時，《工業(yè)酶制劑通用試驗方法》（QB/T1803-2023）為酶活力測定提供基礎(chǔ)方法參考，多標(biāo)準(zhǔn)協(xié)同保障檢測合規(guī)性。

　　活力達(dá)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：除明確酶活性絕對值（如≥5000U/g或≥200U/mL）外，還需滿足比活性≥150U/mg蛋白，避免“高酶含量低活性”的劣質(zhì)產(chǎn)品流入市場；

　　穩(wěn)定性要求：產(chǎn)品有效期內(nèi)酶活力下降率≤20%，有效成分含量下降率≤10%；高溫穩(wěn)定性測試中（50℃儲存72小時），活性保留率不低于初始值的80%，適配臨床高溫清洗流程。